NOVEDADES

Contadores de colonias automáticos

Una solución al alcance de la mano

Cada vez más microbiólogos utilizan los métodos de recuento de colonias y placas rápidas en sus rutinas diarias, ya que los procedimientos de recuento y placas bacterianas se han convertido en una necesidad en el flujo de trabajo del laboratorio de microbiología.

Los microbiólogos necesitan resolver el tedioso problema de contar colonias que, a veces, son demasiado pequeñas y pueden quedar enmascaradas por el color específico del medio de cultivo o la enumeración en sí es lenta y larga. Es por eso que estas rutinas diarias necesitan una forma mejor y más eficiente de optimizar los procesos empleados.

Actualmente existen diferentes métodos con el mismo fin: determinar el número de colonias (UFC) en una muestra de alimento, fármaco o agua. De esta forma, utilizando un volumen conocido de los resultados de la muestra, simplemente se extrapola el número de UFC por placa a UFC por ml de cultivo bacteriano o gramos de muestra. La fórmula general para calcular UFC/ml es bien conocida:

El número de microbios/ml= número de colonias x dilución de la muestra.

Métodos de contador de colonias: los problemas de conteo

De acuerdo con FDA BAM (Capítulo 3), el rango adecuado de recuento de colonias es de 25 a 250 colonias por placa. Cuando las placas tienen más de 250 UFC, se consideran demasiado numerosas para contarlas o pueden inhibir el crecimiento de algunas bacterias.

Por otro lado, las placas con menos de 25 colonias no tienen colonias suficientes para considerar la placa estadísticamente representativa de la muestra analizada. Por lo tanto, para obtener resultados óptimos de la extensión de la placa, antes de inocular la muestra en la placa, debemos realizar una dilución en serie y sembrar al menos tres placas. Este rango también varía según el método utilizado.

Después de incubar la placa en condiciones apropiadas para el microorganismo, se cuentan las colonias. Para los métodos de esparcir, verter o soltar, el recuento de colonias se explica por sí mismo: contar cada punto de colonia una vez. Se puede usar un marcador para señalar cada colonia contada en la parte posterior de la placa de Petri.

La rejilla utilizada en el revestimiento en espiral se divide en 8 secciones y se divide en 4 anillos concéntricos. El conteo se limitará a las secciones de 3 y 4 anillos de la cuadrícula de conteo para placas de Petri de 100 mm y a los sectores de 1, 2, 3 y 4 anillos en placas de 150 mm. Cada anillo se divide además en tres anillos (3c, 3b, 3a y 4c, 4b, 4a).

El conteo se lleva a cabo en 1/8 de los sectores de los anillos de la rejilla de conteo, debe comenzar en el anillo más externo de la rejilla y continuar hacia adentro. Cuando se cumpla un conteo de 20 colonias, se puede reanudar el conteo hasta contar el resto de colonias en este mismo sector del anillo, entonces se debe detener.

A continuación, se deben contar las colonias que están presentes en los mismos anillos del sector opuesto. Con la Chapadora en Espiral se proporciona una tabla para conocer el volumen dosificado en el anillo donde se ha realizado el conteo y el método empleado. Por tanto, siguiendo esta fórmula podemos saber rápidamente las UFC/ml:

UFC/ml = (N’ + N’’) / (V / 4)

N’ = Recuento de UFC en el primer sector de 1/8 de anillo = UFC

N” = Recuento de UFC en el sector opuesto de 1/8 de anillo = UFC

V = Volumen del espacio correspondiente

Los métodos convencionales: una comparación con placa espiral y Eddy Jet

Por lo tanto, cuando se comparan los tres métodos convencionales (placa de vertido, placa de extensión superficial y recuento de gotas) con el método de la placa en espiral, encontramos algunas desventajas. El principal radica en la naturaleza repetitiva del trabajo, por lo que no es de extrañar que los microbiólogos hayan buscado durante mucho tiempo un medio para mecanizar técnicas de recuento viables.

Este sistema permite, por un lado, estimar concentraciones microbianas en un rango de unos tres órdenes de magnitud, por ejemplo, Eddy Jet con una sola espiral puede tener un rango de detección entre 4,10² y 4,10⁵ en las mejores y más útiles siembras. de 50µl, sin recurrir a diluciones seriadas de la muestra y utilizando una única placa de agar para cada muestra.

Por tanto, el método de la placa espiral puede sustituir ventajosamente a cualquiera de los otros métodos para la estimación cuantitativa de microorganismos viables en alimentos. Y podemos aumentar la velocidad de recuento de colonias utilizando un contador de colonias automático.

Soluciones: The Dot y SphereFlash®

La tecnología de IUL facilita y acelera el proceso utilizando iluminación LED. La elección de una buena iluminación para un contador de colonias es clave. La orientación óptima de la luz reduce errores durante el conteo, reduciendo artefactos, y aumentando la discriminación de colonias:

DOT: el uso de un contador digital como DOT puede ser útil para los laboratorios de microbiología involucrados en la enumeración de colonias, el operador puede marcar las colonias detectadas con un marcador diseñado específicamente, mientras que una pantalla digital aumentará los recuentos totales. El contador de colonias DOT de IUL tiene una lente grande de 120 mm de diámetro con una potencia de aumento DINx2. La luz se puede ajustar a las necesidades del usuario y tiene en cuenta la luz ambiental dentro del laboratorio.

SphereFlash: el SphereFlash es un contador de colonias automático que cumple con todos los requisitos que se pueden exigir en un laboratorio de microbiología moderno. Con su versión de software Colony Lite, realiza el conteo de colonias de manera simple y confiable gracias a su software de clase mundial y su sistema de iluminación incorporado patentado.

La iluminación se realiza a través de LEDs que se orientan a la pared interna de una cámara esférica en movimiento.

Su cámara esférica patentada elimina los reflejos tanto en las colonias como en la placa de Petri y proporciona una iluminación uniforme para una captura de imagen mejorada que conducirá a resultados mejores, más confiables y consistentes.

Un contador de colonias automático permite a cualquier laboratorio de microbiología moderno realizar el recuento de colonias de forma sencilla y fiable. Esto conduce a resultados estandarizados y precisos tanto para recuentos de placa completa como de sector.

Sin embargo, aquellas empresas reguladas por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) que deseen utilizar registros de calidad electrónicos y firmas electrónicas deben seguir la normativa 21 CFR Parte 11 que implementa controles, incluidas auditorías, validaciones de sistemas, pistas de auditoría, firmas electrónicas y documentación para software. y sistemas involucrados en el procesamiento de los datos electrónicos.

El requisito de FDA 21 CFR Parte 11

La FDA emite regulaciones que brindan criterios para la aceptación por parte de la FDA, bajo ciertas circunstancias, de registros electrónicos, firmas electrónicas y firmas manuscritas ejecutadas en registros electrónicos como equivalentes a registros en papel y firmas manuscritas ejecutadas en papel.

Esta regulación tiene como objetivo permitir el uso más amplio posible de la tecnología electrónica, garantizando la responsabilidad de la FDA para promover y proteger la salud pública.

Si está buscando un instrumento que cumpla con el 21 CFR PARTE 11, debe tener en cuenta los siguientes elementos:

Para controles de sistemas cerrados, sistemas a los que el acceso está controlado por personas responsables del contenido de los registros electrónicos en ese sistema. Estos controles incluyen medidas diseñadas para garantizar la integridad del sistema, tales medidas incluyen:

  1. Validación.
  2. La capacidad de generar copias precisas y completas de los registros.
  3. Protección archivística de registros.
  4. Uso de registros de auditoría generados por computadora y con marca de tiempo.
  5. Uso de controles apropiados sobre la documentación de los sistemas.
  6. Una determinación de que las personas que desarrollan, mantienen o usan registros electrónicos y sistemas de firma tienen la educación, capacitación y experiencia para realizar las tareas asignadas.

El reglamento también aborda la seguridad de los sistemas cerrados y exige que:

  1. El acceso al sistema debe limitarse a personas autorizadas.
  2. Se utilicen verificaciones del sistema operativo para hacer cumplir la secuencia permitida de pasos y eventos, según corresponda.
  3. Los controles de autoridad se utilizarán para garantizar que solo las personas autorizadas puedan usar el sistema, firmar electrónicamente un registro, acceder a la operación o al dispositivo de entrada o salida del sistema informático, alterar un registro o realizar operaciones.
  4. Las comprobaciones de dispositivos (por ejemplo, terminales) se utilicen para determinar la validez de la fuente de entrada de datos o instrucciones de operación.
  5. Se establecen y cumplen políticas escritas para responsabilizar a las personas por las acciones iniciadas con sus firmas electrónicas, para impedir la falsificación de registros y firmas.